1.包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度(1～10μg/ml)，每凹孔加0.3ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱。
2.洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次，每次5分鐘。
3.分2組，a組加酶標記抗原和被檢抗原Elisa試劑盒混合液0.2ml，b組只加酶標記抗原液0.2ml，37℃作用1～2小時。(混合液可作成不同稀釋度)
4.洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次，每次5分鐘。
5.加入0.2 ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘(另作一空白對照，0.4ml底物加0.1ml終止劑)。
6.加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。
7.用酶標比色計測定a、b兩組OD值，并求出a、b、OD值的差數。
Elisa試劑盒的注意事項：
1.干冰是固體二氧化碳，溫度為零下78℃，濕冰就是冰的溫度，一般為冷凍條件的溫度，如在零下20℃冷凍的冰的溫度為零下20℃。對于一些酶類等蛋白產品，需要干冰運輸，其他大多數生化試劑采用濕冰即可;
2.運輸常溫試劑的時候，不需要冰。對于需要冷藏的試劑，在用冰運輸的時候，要把試劑同冰之間有隔離物，不能直接接觸試劑包裝，如試劑外面加裝盒子，在盒子外面加冰，基本都采用冰塊，不能直接用水結成的冰，因為冰融化后會形成水，容易污染試劑。加冰塊的量沒有嚴格限制，以試劑Elisa試劑盒四周都處于冰塊包圍為宜;
3.不要小看生物試劑的量，很多抗體類試劑、酶類試劑是很貴的，可以達到上千元/mg(即每公斤幾百，上千萬元)，其保存條件也是很嚴格的，否則容易失去活性。運輸的時候建議使用冰塊，而非碎冰，
主要原因：(1)碎冰的溫度高，而冰塊的溫度更低;
(2)冰塊可以更長時間的保持低溫;
(3)碎冰容易化成水。
